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HILIC親水作用模式知多少?

更新時(shí)間:2021-12-17 點(diǎn)擊次數(shù):4781

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小伙伴們平時(shí)使用最多的就是反相色譜柱(RPC)和正相色譜柱(NPC),當(dāng)我們遇到化合物在正相模式下強(qiáng)保留,在反相模式下不保留或保留很弱的情況時(shí)該怎么選擇色譜柱呢?


相信小伙伴們的第一反應(yīng)是用HILIC色譜柱,那今天小編就和大家分享一下親水模式色譜柱的作用機(jī)理和日常維護(hù),希望對(duì)大家有所幫助。

HILIC柱也叫親水作用色譜柱,是正相色譜柱的一種變化,即固定相是極性填料,使用的流動(dòng)相是甲醇、乙腈、水等極性溶劑。極性物質(zhì)在親水作用色譜里優(yōu)先被保留,這意味著很多在反相色譜里保留很弱的物質(zhì)可以使用親水作用色譜分離。

親水模式色譜常見的固定相鍵合類型有:純硅膠、氰基、二醇基、酰胺基和兩性離子等。

在HILIC模式下,溶劑極性順序:水>甲醇>乙醇>異丙醇>乙腈>丙酮,在此模式下不建議同時(shí)使用水和甲醇作為流動(dòng)相,因?yàn)檫@兩種溶劑的洗脫能力強(qiáng)。


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HILIC模式的保留機(jī)理綜合了液液分配、離子交換作用和氫鍵作用,具體如下:


//溶質(zhì)分子首先在主體流動(dòng)相與色譜填料表面的半固定的高極性水膜之間發(fā)生液液分配;

//次級(jí)保留作用包括色譜填料表面硅醇基和/或極性官能團(tuán)與帶電分析物間發(fā)生的離子交換作用;

//氫鍵作用發(fā)生在帶正電的分析物與帶負(fù)電的表面硅醇基之間。

其主要應(yīng)用包括:

1、分離在反相色譜上不保留或保留較弱的化合物;

2、分離正相模式下強(qiáng)保留化合物。

月旭現(xiàn)有的HILIC系列色譜柱:


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新柱是保存在純乙腈中的,所以小伙伴們拿到色譜柱后需先用純乙腈低流速活化后再使用(若測(cè)試方法中使用了含緩沖鹽的流動(dòng)相,先用70%乙腈水過渡)。


HILIC系列色譜柱的日常維護(hù)和保存(建議反沖):


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當(dāng)色譜柱使用一段時(shí)間后,出現(xiàn)壓力升高、峰形異常、柱效降低、分離度下降等異常情形時(shí),先用過渡流動(dòng)相(70%乙腈)沖洗掉色譜柱中的緩沖鹽,再按照如下方式?jīng)_洗(建議反沖):


HILIC Amide柱、HILIC-NH2柱、HILIC-Silica柱


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如上就是關(guān)于HILIC親水模式的一些原理和維護(hù)方法。

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